www.1862.net > DnA测序图谱前面一段单一峰后半段出现重叠峰是为什么

DnA测序图谱前面一段单一峰后半段出现重叠峰是为什么

碱基序列恰好互补.

如果是质粒,多半是非单克隆.如果是PCR产物一般是引物多结合.还有一种可能是就你的模板基因是双倍体杂合子

你的的片段不纯.也即pcr出来产物可能不止一种,杂带影响.建议pcr产物跑胶跑高浓度低电压长距离,这样尽量切割较纯的带回收送去测序.

就是说在你测的那一个基因本来应该是A的话,但是在他们测的时候出现了G的峰和A的峰重叠,导致他们无法判定这一点的基因应该是什么,应该把你的片段与所测的做对比.这是一个基因的信号重叠.但是按照你的意思所说的好象是整个片段都是重叠,最有可能的就是你所测的片段太长,现在技术达不到那么精细,其它还有可能是他们设计的的引物不对导致所有的信号重叠

这个,取决于你所测的片段的来源吧.Poly A很可能是RT-PCR中使用了Oligo d(T)的结果,当然也可能是DNA片段本身就含有一部分连续的A,还可能是测序公司的失误.你应该使用的是PCR后连接载体后扩增出的重组质粒进行测序的.这样M13F是从一侧对插入片段进行测序.这边如果有问题,那么就可以使用M13R,也就是另一侧进行测序.这样就可以避开那段Poly A,让测序结果更加可信一些.说实话,你的问题中信息太少,很难做出太准确的回答.

样品本身被污染,这常常发生在样品为质粒和菌液的情况中.当使用通用引物测序时,如果刚好和样品中的几个质粒均能结合,那么就会出现这种情况,而且在同一位置上还可能有不止两个峰形;样品不是单一模板,这常常发生在样品为PCR产

你这两个图不像杂合,也不是测序错误,而是前面C信号太强,在下一次碱基测的时候信号还没有衰减下去,就有了这么个貌似杂合的峰.如果你知道自己提的就是纯合子的话,应该没什么问题.当然,如果你的目的是测SNP的话,可以留意一下上面那张图.

产生套峰原因:假若为菌或者质粒为双位(引物结合位点不单一)建议换引物测序实验,另外一个是由于存在污染重新挑单克隆进行测序实验即可.若为PCR一个是由于存在非特异扩增.一个是引物特异性不好.另外一个原因是引物为兼并引物.'假若套峰小峰为前或后的主峰说明是由于移码造成既引物合成存在问题.可以把测序结果发给合成公司重新合成.以上供参考!具体原因请发峰图参考!

这样的情况可能是模板的纯度,浓度有问题,测序峰图应该是杂乱的,或者是无结合信号.

检杂合性突变突变位置见明显双峰且高度约峰值半 PCR直接测序定困难关键看引物纯化要引物合纯度加合适纯化测序应该没问题zouyongxin所说情况双峰高度半完全需要双向测序验证给简单峰图看看

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